Meny

Javascript verkar inte påslaget? - Vissa delar av Lunds universitets webbplats fungerar inte optimalt utan javascript, kontrollera din webbläsares inställningar.
Du är här

Light sheet och konfokalmikroskopi

Biologiska institutionen har två konfokalmikroskop, ett Zeiss LSM 510 META och ett Leica SP8 DLS som dessutom är ett light sheet mikroskop. Båda mikroskopen är tillgängliga mot användaravgift.

Light sheet mikroskopi

Light sheet mikroskopi är ett skonsamt sätt att avbilda känsliga prover eller snabba biologiska processer in vivo. Provet är upplyst i ett plan åt gången och fluorescerande signaler detekteras vinkelrätt mot detta plan. Eftersom det inte finns något ofokuserat ljus reduceras fototoxiska effekter till fokalplanet. Light sheet mikroskopin har alltså en inneboende optisk snittningsfunktion. Genom att flytta provet genom det belysta planet kan 3D-bilder av ett prov skapas. Med denna teknik kan man återskapa stora 3D-volymer med mycket högre hastighet men med något lägre upplösning jämfört med traditionell konfokalmikroskopi.

Två personer sitter framför ett mikroskop och en datorskärm i ett mörkt rum.
Leica SP8 DLS Foto: Erling Jirle

Leica SP8 DLS specifications

Vårt Leica SP8 DLS är utrustat med:

Ljuskälla: fem lasrar med våglängderna:

  • 405 nm
  • Solid state 488 nm
  • Solid state 514 nm
  • Solid state 552 nm
  • Solid state 663 nm

Detektorer = två PMT:s (photomultiplier tubes), en HyD GaAsP-spectral detektor, en PMT för genomgående ljus
Objektiv för konfokal: 10x/0.3, 20x/0.75 IMM, 25x/0.95W, 63x/1.4 Oil, 63x/1.3 GLYC
Objektiv och speglar for light sheet mikroskopi: imaging 25x/0.95W DLS, 10x/0.3W DLS, illumination 2,5x/0.07, 5x/0.15, DLS TwinFlect 2.5mm, DLS TwinFlect 5mm
Mjukvara: LAS X med HyVolution, Dye Finder, 3D Visualisation, Microlab (för FRAP, FLIP och FRET) och Huygens Base Package för Dekonvolution

Konfokalmikroskopi

Konfokalmikroskopi – eller egentligen konfokal lasersvepmikroskopi (eng.: confocal laser scanning microscopy; CLSM) – är en mikroskopimetod som är speciellt lämpad för fluorescerande eller reflekterande mikroskoppreparat. Konfokalmikroskopet eliminerar ljus som inte kommer från objektivets fokalplan, och skapar därigenom en tydlig bild av strukturer i fokus – även i preparat som är för tjocka för vanlig fluorescensmikroskopi. Om man tar en serie bilder på olika djup i ett tjockt preparat kan bildserien användas för 3D-analys och 3D-rendering, och det är möjligt att visualisera strukturer som inte skulle vara urskiljbara i konventionell ljusmikroskopi.

Vårt Zeiss LSM 510 META är utrustat med:

Ljuskälla: fyra lasrar, med våglängderna:

  • DPSS 405 nm (excitation av t.ex. DAPI, Hoechst 34580)
  • Ar ion laser: 458, 477, 488, 514 nm (488 nm för excitation av t.ex. Cy2, Alexa488, GFP, FITC)
  • DPSS 561 nm (excitation av t.ex. Cy3, Alexa 546 – Alexa 592, Texas Red, TRITC)
  • HeNe ion laser: 633 nm (excitation av t.ex. Cy5, Alexa633 - Alexa 647)

Detektorer: två PMT (photomultiplier tubes) och en META detektor.
Objektiv: 5x/0.15, 10x/0.45W, 20x/0.8, 25x/0.8IMM, 40x/1.3Oil, 63x/1.4Oil
Mjukvara: Zen 2009

Skanningenheten på ett Axiovert konfokalmikroskop
Scanningenheten monterad på Zeiss Axiovert, det inverterade mikroskopet. Foto: Peter Ekström
Sidansvarig:

Kontakt

Ola Gustafsson

Ola Gustafsson
Forskningsingenjör
Funktionell zoologi

Telefon: 046-222 93 43
E-post: Ola [dot] Gustafsson [at] biol [dot] lu [dot] se

Acknowledgement

Om du publicerar resultat som du fått fram vid användandet av biologiska institutionens mikroskop uppskattar vi om du nämner oss i acknowledgements. Tex "We acknowledge the Microscopy Facility at the Department of Biology, Lund University".

Länkar

Bra webbplatser på engelska med info om mikroskop och mikroskopitekniker:

Light Sheet mikroskopi

Konfokalmikroskopi

Annat